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上海紀寧實業有限公司 >>> 技術文獻

間接法是檢測抗體的方法

點擊次數:108 發布時間:2022-08-22

       競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合,因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下:

 ?。?)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結合的抗原及雜質。

 ?。?)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合,在洗滌過程中被洗去。

 ?。?)加酶標抗抗體:與固相復合物中的抗體結合,從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體,可用酶標羊抗人IgG抗體。

 ?。?)加底物顯色:顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

  本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。

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操作步驟如下:

 ?。?)將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。

 ?。?)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原,則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原,則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合,競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結合的機會,使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原,保溫后,酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。 

       (3)加底物顯色:參考管中由于結合的酶標抗原最多,故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡,表示標本中抗原含量越多。


 
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